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放大字体  缩小字体 发布日期:2015-11-03 08:55  浏览次数:57
摘 要:芹菜素(apigenin)是一种广泛分布于多种食用 植物及中草药中的黄酮类化合物。药理研究表 明芹菜素apigenin具有抗肿瘤、抗炎、抗动

芹菜素(apigenin)是一种广泛分布于多种食用 植物及中草药中的黄酮类化合物。药理研究表 明芹菜素apigenin具有抗肿瘤、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗血 栓形成及抗焦虑等作用。目前,对芹菜素apigenin的作用 机制及体内药动学的研究日益受到重视。有文献报 道,动物口服主要成分是木犀草素和芹菜素apigenin的菊花 提取物后,HPIC法检测不到血浆中的芹菜素apigenin。 有研究建立了SPE一柱切换HPLC法分析人尿液中的芹菜素apigenin浓度,但实验条件要求较高。本研究的 目的是建立HPI C法测定静脉给药后大鼠血浆和 胆汁中的芹菜素apigenin浓度,用于芹菜素apigenin的药动学研究。
 

l 材 料

 1,1 仪器和试剂 1100型HPLC仪(美国Agilent 公司)。芹菜素原料药(纯度为98%) ;菊花提取物芹菜素apigenin对照品;戊巴比妥钠(bet36365体育备用网址交通大学医学院附属新华医院动物房提供);甲醇(色谱纯)、磷酸和乙酸乙 酯(HPI C级,美国Tedia公司);异丙醇(分析纯,常 熟市杨园化工有限公司);水为本院自制双蒸水。 1.2 动物SD雄性大鼠,体重220~270 gEbet36365体育备用网址斯 莱克实验动物责任有限公司,动物许可证号:SCXK (沪)2003—0003~。

 2 方法和结果

 2.1 溶液的配制 (1)标准溶液的配制精密称取 芹菜素apigenin对照品2O mg,置于100 mL容量瓶中,用甲 醇定容配制成浓度为200 t,g/mL的储备液。储备 液依次用甲醇稀释成8O、4O、20、10、5、4、2.5、1、 0.4 g/mL系列浓度,一4℃冷藏备用。(2)外标样 品溶液的配制取空白大鼠血浆或胆汁,分别加入标准溶液,配制浓度分别为0.04、0.1、0.4、1、4、 8~g/mI 的血浆外标样品溶液和0.25、0.5、1、2、4、 8~g/mL的胆汁外标样品溶液,一4℃冷藏备用。 2.2 色谱条件Dikma Cl8色谱柱(250 mm× 4.6 mm,3.5 fm),流动相为甲醇:0.2 (V/V)磷 酸水溶液:66.5:33.5,检测波长350 nm,流速为 0.8 mL/min,柱温35℃ ,进样量l0 I 。

 2.3 样品处理 取含药肝素抗凝血浆样品或胆汁 样品0.2 mI ,加5 mol/I 磷酸40 I ,振摇后加提 取溶液(乙酸乙酯:异丙醇一19:1)0.6 mI ,充分 振摇,于1.3×10 r/min(离心半径5.8 cm)离心 5 min。血浆样品取有机层0.45 mL,胆汁样品取有 机层0.5 mL,50。C水浴氮气吹干,残余物用100 fI流动相溶解,取10肚L进样分析。

 2.4 方法学考察

 2。4.1 方法专属性 分别取6只大鼠的空白血浆 和空白胆汁,按2.3项下方法操作;将一定浓度的芹 菜素标准溶液加入空白血浆和胆汁中,同法操作;大 鼠静脉注射20 mg/kg芹菜素apigenin对照品后1 h取血浆 样品,同法操作;大鼠静脉注射芹菜素apigenin对照品 20 mg/kg后2~4 h取胆汁样品,同法操作,得到各 自的色谱图见图1。结果表明,血浆中的内源性物 质不干扰芹菜素apigenin的测定。

 2.4.2 标准曲线的制备 取各个浓度的外标样品 溶液,按2.3项下方法处理后进样测定。以芹菜素apigenin 对照品的峰面积(A)对相应的浓度(c)进行线性回归。结果显示,血浆样品在0.04~8>g/mI范围内 线性良好,其回归方程为:A一56.98 f+1.41,r一 0.999 8。胆汁样品在0.25~8~g/mI范围内线性 良好,其回归方程为:A一81.97 c一3.3l,r一 0.999 8。

 2.4.3 精密度和准确度实验 取空白血浆和空白 胆汁,配制低、中、高浓度分别为0.04、l、8 g/mL 的血浆质控样品和浓度为0.25、2、8#g/mL的胆汁 质控样品,连续测定5 d,将质控样品测得浓度与配 制浓度相对照,求得准确度与精密度,见表1。

 2.4.4 稳定性实验 取空白血浆和空白胆汁配制 低、中、高浓度分别为0.04、1、8 g/mL的质控样 品,分别考察样品冷冻一解融1次和2次;室温下放 置4 h以及冷冻l周的稳定性。每一浓度进行3样本分析。结果表明,质控样品在各条件下均稳定 (RSD

 2.5 药动学研究

 2.5.1 血浆样本采集 SD大鼠5只,尾静脉注射 给予2O mg/kg芹菜素apigenin对照品,于给药即刻及给药 后2.5、5、10、2O、30、60、90、120、180和240 min眼 眶取血,血液用适量肝素抗凝,3000 r/min(离心半 径5.8 cm)离心10 min,血浆转移至1.5 mL聚丙烯 管,置于~2O℃冰箱保存,待测。 2.5.2 胆汁样品采集 SD大鼠5只,用3 戊巴 比妥钠麻醉,仰卧固定,腹部切口,胆道插管完成后, 尾静脉注射20 mg/kg的芹菜素apigenin对照品,分别收集 给药后0~2、2~4、4~12、12~24 h的胆汁。收集 样本所用的聚丙烯管中先加入5 mol/I 磷酸 200 L作为稳定剂。精密测定各时间段收集的胆 汁体积,并置于一2O℃冰箱保存,待测。

 2.5.3 药动学参数 根据所测得的血药浓度做血 药浓度一时间曲线。结果显示,静脉给药后血药浓度 迅速下降,表明药物消除迅速。利用DAS药动学参 数计算程序拟合处理,得到静注芹菜素apigenin的血药浓度 时间曲线符合二室模型的特征,主要药动学参数见 表2。

 2.5.4 胆汁排泄实验 胆汁排泄的峰值为给药后 O~2 h内,24 h的总排泄量约为给药量的5.64%。

 3 讨 论

本实验建立了测定大鼠血浆和胆汁中芹菜素apigenin浓 度的方法,并对芹菜素apigenin的药动学进行了初步研究。 大鼠尾静脉给予芹菜素apigenin后体内消除较快,胆汁排泄 迅速,由色谱图可明显看到可能的代谢产物色谱峰, 推测为葡萄糖醛苷结合物。有研究报道,给狗灌服 主要成分是木犀草素和芹菜素apigenin(含量分别为7.60 和5.19 )的菊花提取物后,血浆中不能检测到芹 菜素的含量

[3]。研究者分析可能由于经胃肠道给药 后,芹菜素apigenin转化为木犀草素,也有可能是芹菜素apigenin快速 通过胆汁排泄。因此,本研究给大鼠注射芹菜素apigenin后, 考察了芹菜素apigenin在大鼠血浆和胆汁中的浓度。有体外 实验研究表明,芹菜素apigenin的代谢产物有木犀草素、野黄芩苷及异野黄芩苷 。作者所在的课题组正在对胆 汁样品中可能的芹菜素apigenin代谢产物进行结构研究。

 芹菜素apigenin静脉注射后,血药浓度范围较大,为了使 分析样品的浓度在线性范围内,有必要对高浓度的 样品进行稀释,所以本研究考察了血浆和胆汁样品 分别稀释至原浓度的1/10和1/2o后的准确度和精 密度,结果表明稀释不影响高浓度样品的分析测定。


 
 
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